一、 原理
将特异诊断血清与吖啶橙溶液混合制成诊断液，加入被检标本中，当抗原、抗体一致时，即结合形成菌团，而后被吖啶橙着染，在荧光显微镜下观察，可看到带有荧光的具有一定形态结构的菌团。如标本中无相应的细菌存在，抗原与抗体不能发生反应，也就不能形成特异的荧光菌团。
吖啶橙免疫荧光菌团法是一项把荧光抗体染色技术的敏感性、血清学反应的特异性、显微镜检查的精确性三者结合一体的实验方法，同时，还可用适当的方法取出荧光菌团进行常规的分离培养鉴定，因而本法也未失去分离培养优越性的特点。
二、 材料和方法
(一) 材料
1、 01%吖啶橙(acridine orange,AO)溶液，用无菌蒸馏水配制，4℃保存。
2、 被检菌悬液、高免血清。
3、 荧光显微镜。
(二) 方法
1、 吖啶橙荧光抗体的制备高免血清09ml(1∶8稀释)，加入01%吖啶橙01ml，混匀，即为吖啶橙荧光抗体(AOAb)诊断液，用无菌生理盐水代替高免血清制成对照液。
2、 操作方法取2支洁净试管，分别加入09ml被检菌悬液，试验管再加入01mlAOAb诊断液，对照管加01ml对照液，混匀，以1000～1500 r/min离心10～15min，倾去上清液，将试管直立片刻，然后将试管内残留液体和沉淀物轻轻摇匀，倒在玻片上，置荧光显微镜下进行观察。
三、 结果判定
对照管应无荧光菌团出现，试验管按以下标准进行判定：
－无菌或无菌团；
±荧光菌团直径1mm左右；
+荧光菌团直径2mm左右；
++荧光菌团结构清晰，3～4mm；
+++荧光菌团结构清晰，5～6mm；
++++荧光菌团结构清晰，10mm以上。
以出现“++”以上者判为阳性反应。
四、 注意事项
1、 高免血清的稀释倍数应根据其效价而定，效价高时，稀释倍数要高，效价低时，稀释倍数也应该低。
2、 离心速度不宜过高，时间不宜过长，否则可使凝集物呈结实块状，影响对菌团结构的观察。
3、 吖啶橙的最终浓度可在1∶10万～1∶100万之间选择，过高或过低都影响结果的判定，以出现黄绿色的荧光为准。
4、 振摇管底沉淀物时，用力不宜过大，否则会使形成的菌团分散。
5、 对于疑似菌团，可于37℃湿盒中感作3～4h，重新观察。
