细胞免疫荧光实验步骤

最后更新：2009-9-20 阅读次数： 【字体：小 中 大】

1. 细胞一定要贴在玻片上（最好可以放入24孔板），为后面照像打基础。细胞密度适中，大约60-75%满片即可，否则容易脱片。
2. 取出细胞后用4%多聚甲醛固定15分钟，现用现配。（以下各步骤切毋使玻片干燥）
3. PBS冲洗
4. 0.1%Triton作用20分钟
5. PBS冲洗
6. 10%正常血清封闭10分钟
7. 加入一抗，4度孵育过夜（找个小瓶盖将小玻片支起来，抗体就不容易溢出），还要记住“砸片”，就是抗体从较高处落到片子上，以分布均匀。抗体稀释度1：60，我最常用！
8. PBS冲洗4次，各5分钟
9加入荧光二抗，室温30分钟。抗体稀释度1：400，我最常用！
10.  同8。
11. 90%甘油封片。也很关键阿，多封几次才有体会。
12. 避光保存，或到显微镜下观察。