1.实验步骤（肿瘤病人血清标本）
①、包被：用包被缓冲液将MBP/OY-TES-1稀释至1.0µg/ml，取100µl/孔包被酶标板，4℃湿盒过夜。1×PBS-T洗板3次（室温静止30sec/次），甩去液体，用纸吸干；
②、封闭：5%脱脂奶（200µl/孔）37℃封闭30min，1×PBS-T洗板4次，甩去液体，用纸吸干；
③、上血清：加入待检稀释血清（1:400）、阳性对照和空白对照各100µl/孔，37℃湿盒孵育1h，1×PBS-T洗板4次，甩去液体，用纸吸干；
④、上二抗：加入Biotin-绵羊抗人IgG单克隆抗体（1:1000），37℃湿盒温育1h，1×PBS-T洗板4次，甩去液体，用纸吸干；
⑤、上标记物：加入Avidin-HRP（1:1000），37℃湿盒温育30min，1×PBS-T洗板4次，甩去液体，用纸吸干；
⑥、显色：TMB避光显色15min，加1N H2SO4终止反应；
⑦、酶标仪OD450与OD630双波长读数。
2.心得体会：
①、我没用试剂盒做（尚未有商业化试剂盒开发），所以一切数据都要自己计算，包括包被蛋白浓度，一抗浓度，二抗浓度，计算时务必不能出错，要不就会功亏一篑。
②、用任何试剂前都要把试剂混匀，因为蛋白是很容易沉淀的。
③、用固定的几把移液器，这样可以尽可能的较少误差。
④、湿盒孵育前要先把湿盒放在37°进行温度平衡，这样可以减少达到平衡的时间，而且也可以避免符合试验温度的孵育时间不够。
⑤、等板底的水珠挥发以后再读数，要不会出现负值。
