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中生网 > 实验技术 > 遗传免疫 > 实验室检测和诊断HIV感染的标准

实验室检测和诊断HIV感染的标准

更新:2015年04月30日 阅读次数: 【字体:

作者:北京协和医学院研究生院 康凤凤 、胡丽涛
? ? ? ? ? ?卫生部北京医院卫生部临床检验中心 王治国

【摘要】目的 讨论实验室正确进行HIV感染检测的策略及质量控制。方法 参照CLSI M53-P及相关文件。结果 检测HIV感染检测主要包括初步试验和补充试验,实验室应根据特定情况如急性HIV感染、近期HIV感染的诊断,怀孕期、分娩期和新生儿期HIV感染,采取特定的检测策略和结果解释。结论 HIV感染的正确诊断对阻止HIV的传播及适当的临床治疗是至关重要的,实验室应严格按照CLSI标准进行HIV检测及结果解释,以提高检验结果的可靠性,为临床提供有效的诊疗依据。

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【关键词】策略;初步试验;补充实验;HIV-1;HIV-2

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HIV诊断试验有两个主要目的:

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1)验证出现HIV感染体征或症状的个体是否是真正感染;

2)确定接触过HIV但无症状的个体的HIV感染状态。及时发现HIV感染者至关重要,这不仅可适时地提供有效的治疗,也可减少疾病的传播。因此实验室必须正确掌握HIV感染的检测和诊断标准。HIV的检测试验有初步试验和补充试验两大类。其中初步试验包括HIV抗体的检测(HIV-1,HIV-2,HIV-1/HIV-2和HIV-1/HIV-2/O组),血液病毒学检测试验(p24抗原,HIV RNA和前病毒DNA)。如果标本在初步试验中是非反应的,则通常被认为是HIV阴性。如果有已知的高风险接触,通常建议进行随访,因为很多初步抗体试验可能不敏感。相反,如果初步试验是反应性,一般需进行重复检测,如果结果仍然是反应性,再进一步进行补充试验来完成HIV诊断。目前使用的补充试验包括免疫印迹(WB),间接免疫荧光检测(IFA),线性免疫试验(LineIA)和核酸检测(NATs)。

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一、检测策略

HIV检测策略是为明确是否存在HIV感染而采取的一系列检测计划。一个或多个联合检测试验可提高检测的总体灵敏度或特异性。如果联合检测两个初步试验的任一一个为反应性即为阳性,这提高了单独试验的灵敏度。在这种情况下,结合灵敏度反映了任一试验所能达到的最好的灵敏度。如果策略需要两个试验都为阳性,则提高了特异性,而结合灵敏度却低于任一单独试验。尽管新一代试验的灵敏度和特异性都大大提高,但仅使用单一实验用于HIV诊断是很少见的。

以下出现的策略适用于病人的初步筛查或诊断,不适用于捐献者筛查,其对象包括24个月以上的病人标本。

在选择检测策略时实验室考虑因素:

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1)检测目的,如诊断还是监测;

2)患病率、发病率和人群的其他特征,如亚型;

3)TAT要求(如职业接触后的紧急结果);

4)样本类型,如血浆/血清、全血或唾液;

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5)当地法规,如监管机构的要求或准则;

6)当地购买合同和政策;

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7)试验有效率;

8)试验合适度;

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9)检测量;

10)实验室大小;

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11)可以使用自动化体系的大小和费用的先决条件;

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12)实验室人员技术水平;

13)标本谱系知识,特别是先前的检测结果和病人的过去史;

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14)病人追踪的机会,包括住院和相关的额外检测;

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15)费用。

应明确检测策略潜在的局限性,包括:如果初步试验仅针对HIV-1,虽然存在交叉反应性,试验结果可能是反应性,但HIV-2和HIV-1 0组还是有可能漏检。HIV-1 NAT不能检测HIV-2。在血清转化期,某些补充试验可能为阴性。如果有必要应采取HIV-1 RNA或HIV-2 DNA确认初步试验,或者随访标本检测也可证明是血清转化。如果每个制造商的检测结果不可靠,应重新检测另一新标本。

一些策略中的步骤数和复杂性可增加TAT,使结果推迟。当地法规可能要求采用特定的试验或策略。

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在策略流程图图中,A表示初步试验,可能是常规试验或者快速试验。B代表鉴别试验,用来区分HIV-1或HIV-2感染。C代表HIV-1NAT。D表示HIV-1抗体补充试验。策略中所有试验应遵循制造商说明书、实验室规章、适用的监管机构要求。

1 策略Ⅰ:单独的初步抗原/抗体联合免疫学试验

策略Ⅰ 使用灵敏的初步筛查试验,能在急性、早期和持续感染阶段检出HIV-1和HIV-2(最好的是抗原/抗体联合试验)。初步试验反应性标本应再用能区别HIV-1和HIV-2感染的抗体免疫学检测。如果鉴别试验也是反应性,表明HIV-1或HIV-2抗体存在。如果鉴别试验是阴性,应进一步采取定性或定量NAT来识别或排除急性HIV-1感染。根据急性感染的患病率,初步试验呈反应性标本<3%时,需要进行NAT。参考图1的策略Ⅰ。

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注:1当不能进行抗原/抗体联合免疫学分析时,A可以是IgM灵敏的抗体免疫学试验;
????2 重复A(+)和B(+)根据试验而定;
????3 初步治疗和随访检测进行临床分期;
????4 HIV抗体阳性,进一步检测以排除双重感染;
????5 急性HIV-1感染;
????6 如果有临床症状,考虑进行HIV-2 DNA检测。

如果无法进行抗原/抗体联合试验,可以使用灵敏的IgM抗体免疫试验,如果怀疑是急性HIV感染,血清学阴性的结果应采用NAT进行检测(见策略Ⅵ,图6)。如果NAT示低拷贝数,可检测p24抗原确证急性HIV感染。很多定量NAT的假阳性结果常常<2000copies/ml,专家表示当结果<5000copies/ml时应怀疑为假阳性,并进行重复检测或随访证明血清转化。

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如果怀疑是HIV-2感染,建议检测HIV-2 DNA。HIV-1和HIV-2抗体之间的交叉反应性较双重感染更为常见。当鉴别试验提示HIV-1和HIV-2共同存在时,建议稀释标本或者检测HIV-1RNA或HIV-2 DNA,明确HIV感染的型别。

如果根据策略Ⅰ确定病人为阳性时,建议在开始治疗后用定量病毒载量和CD4+T细胞测定进行临床分期。

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2 策略Ⅱ:HIV-1/HIV-2抗体免疫学试验和HIV-1补充试验

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连续的两个检测策略,其中初步试验应用常规免疫学试验或快速试验检测HIV抗体。如果初步试验为反应性,应进行更特异的补充试验,包括WB、IFA或更新的定性RNA检测,以确证存在感染。基于初步试验的血清转化灵敏度,此策略能识别大多数感染4-6周以上个体的抗体。参考图2的策略Ⅱ。

注:1 此步骤根据试验而定。
????2 如果怀疑是急性感染,参考规则Ⅵ。
????3 进一步采取WB或IFA确认HIV-1抗体是否存在。
????4 初步治疗和随访检测进行临床分期。
????5 考虑检测HIV-2抗体。
????6 一旦试验D检测为不确定性或阴性,建议立即进行NAT。

如果用唾液进行常规初步试验,策略Ⅱ是目前唯一的选择。

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许多初步试验在感染早期较传统的补充试验(如WB、IFA)更灵敏,这增加了补充试验的不确定性或假阴性结果。这些初步试验除了能检测HIV-1,也可能检测到HIV-2和HIV-1 O组,即如果HIV-1/HIV-2初步试验是反应性而补充试验是不确定的或阴性的,说明标本对HIV-2抗体是反应的,这种情况应进行鉴别试验。而且,RNA试验作为补充试验时也不能检出所有的非B亚型、重组型或HIV-2。

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根据策略Ⅱ确定病人为阳性时,建议在开始治疗后用定量病毒载量和CD4+T细胞测定进行临床分期。

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