ELISA方法做两对半，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测，而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。而竞争抑制法的原理：酶标抗体与样本抗体在同样的体系中，与固相抗原竞争结合是等比关系。理论上讲，应该先将样本与酶标抗体先行混匀，然后加入反应也进行。但实际工作中并非如此，都是分开加入反应孔。这样会造成先加入的先结合，与后加入者并不是公平的关系，因而也不符合等比原则。特别是在放置时间长，且温度高的情况下，对结果有很大的影响。
第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究。将94份阴性标本用生理盐水进行1：30稀释，在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体，然后检测结果如下：|
放置时间（min） |
阴性标本数 |
临界值－标本A450nm值 |
假阳性率(%) | ||
|
<0.3 |
0.3~0.7 |
>0.7 | |||
|
0 |
75 |
10 |
3 |
6 |
0 |
|
2 |
68 |
13 |
7 |
6 |
7.4 |
|
5 |
65 |
15 |
8 |
6 |
10.6 |
|
10 |
56 |
16 |
12 |
10 |
20.2 |
|
20 |
38 |
18 |
17 |
21 |
39.3 |
|
30 |
21 |
12 |
18 |
43 |
57.4 |
从上表可以看出，如果同时加入标本与酶标抗体，没出现假阳性现象。2分钟后再加入酶标抗体，由于标本比酶标抗体先结合了两分钟，因此出现了7.4%的假阳性。30分钟后再加，假阳性高达57.4%。因此建议竞争抑制法的项目，加十个样本后立即加酶标抗体，这样对检测结果没有影响。
