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实验技术 > 生物工程 > 基因治疗的一般程序

基因治疗的一般程序

最后更新:2010-1-1 阅读次数: 【字体:
1、目的基因的获得:基因克隆、人工合成、PCR扩增以及基因组的降解等方法。目的基因可以来自人类基因组或cDNA。目的基因必须置于启动子的控制下,还需要有信号肽序列使其分泌到胞外。用标记基因监测目的基因。 
2、受体细胞的选择:一般用体细胞(病变或非病变)作为受体,可选用淋巴细胞、造血细胞、上皮细胞、成纤维细胞、肝脏细胞甚至是肿瘤细胞。 
3、基因转移方法:导入基因有两种方法,一种是回体法(ex vivo):在体外将目的基因导入细胞内,再将这种细胞回输给病人;另一种是在体法(in vivo):将外源基因直接导入体内有关的组织器官。 
4、载体的选择:将目的基因置于启动子调控序列下。 
常用的载体有:质粒载体(穿梭质粒) 、 病毒载体 
5、基因导入的方法: 
(1)、脂质体介导法。 
(2)、受体介导法 。
(3)、理化方法:DNA-磷酸钙共沉淀法 、显微注射法 、电穿孔法 、基因枪。 
(4)、病毒介导的基因转移:反转录病毒 、腺病毒 、腺相关病毒等。
6、转导细胞的选择与鉴定: 
(1)、标记基因技术:目的基因与标记基因同时重组到同一载体,如neor抗药基因可作为标记。 
(2)、基因缺陷型受体细胞的选择:将正常基因导入基因缺陷行靶细胞,用选择性培养基筛选。 
(3)、共转染技术:目的基因表达载体与标记基因表达载体混合,经两次筛选可得到转化细胞。 
(4)、分子杂交鉴定:目的基因和标记基因片段作探针(标记基因片段作探针更佳) 。
提示:本文基因治疗的一般程序属于生物工程文章,主要介绍基因治疗方面的知识,内容仅供学习交流与参考,不代表中生网的观点。
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