1、载体(vector)
能专一性地感染某一类细胞，具有复制起点，能自我复制，具有多克隆位点，以供外源基因插入，具有某种选择性标记，便于筛选重组子。
⑴、细菌的克隆质粒载体
特点：分子量小，拷贝数高；具有若干限制性内切酶的单一酶切位点；外源基因插入不影响复制；具有两种以上的选择标记基因；为基因工
程中最常用的载体。但一般只能接受小于15kb的插入片断。专用于基因或DNA片断无性繁殖的质粒载体。
⑵、（溶原型）噬菌体和病毒
可插入较大的外源DNA片断（20kb），特别适合于基因文库的构建。
⑶、穿梭质粒载体
一个质粒中含有两种宿主细胞的复制起点，可在两种细胞中复制和存在。
如酵母穿梭质粒；Ti质粒
⑷、表达质粒载体
特点：有强启动子；在启动子下游区和起始密码子上游区具SD序列；在外源基因插入序列的下游区有一强转录终止序列。专用于在宿主
细胞中高水平表达外源蛋白质的载体。
2、常用工具酶
⑴、限制性核酸内切酶(restriction endonuleases限制酶)
能专一性地识别双链DNA上的特异碱基序列（含4-6bp，具回文对称结构），并从此序列处同时切断DNA双链。为基因工程中的手术刀。
限制性内切酶形成末端的形式：
⑵、DNA聚合酶（DNA polymerase）
在引物和模板的存在下，根据碱基互补配对的原则，催化脱氧核苷三磷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3'-OH末端，以合成DNA 。
如TaqDNA聚合酶，Klenow酶催化带缺口的双链DNA分子中缺口处3'-OH和5'-P之间磷酸二酯键的形成，以连接缺口。
如：T4-DNA连接酶为从T4感染的E.coli提取E.coliDNA连接酶。
⑶、DNA连接酶(ligase，连接酶)
用途：给载体和cDNA加上同聚“尾巴”以形成粘性末端；对DNA3'-OH端进行同位素标记。
⑷、末端转移酶（terminal deoxynucleotidyl transferase）
催化脱氧核糖核苷酸加到DNA分子的3'-OH末端。聚合作用不需模板，但需Mg2+。
⑸、逆转录酶（reverse transcriptase）
用途:制备基因片段；制备探针等。 催化以mRNA为模板合成其互补的DNA（cDNA）。
3、目的基因的获得
⑴、对已知序列基因的分离
核酸探针杂交法；通过设计引物，用PCR反应从模板扩增获得；通过化学方法或酶法合成。
⑵、对未知序列基因的分离建立基因组文库或cDNA文库，从中筛选出目的基因的克隆。
⑶、通过鸟枪法或差异显示和RT-PCR等方法获得。
4、受体（宿主，host）
转化亲和性，即细胞应易形成感受态；具有使外源高效复制的酶系统，能高水平表达目的基因；为遗传互补型，限制缺陷型和重组缺陷型；
