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实验技术 > 细胞实验 > 流式细胞术(FC)细胞表面染色操作

流式细胞术(FC)细胞表面染色操作

最后更新:2010-12-10 阅读次数: 【字体:

一、直标法

全血标本(EDTA抗凝)

在Facoll管中加入一定体积的直标抗体,加入50/100ul全血, 混匀,室温避光孵育15-30分钟(参照说明书)。

加入1ml/2ml溶血素,振荡混匀,避光室温孵育10分钟,1000rpm离心5分钟,弃上清,混匀,加入2ml PBS,1000rpm离心5分钟。

加入0.5-1ml PBS重悬,即可上机检测。

细胞标本(包括红细胞,PBMC,培养细胞及血小板)

在Facoll管中加入一定体积的直标抗体,加入1×106的细胞,混匀,室温避光孵育15-30分钟(参照说明书)。加入2ml PBS,1000rpm离心5分钟,加入0.5-1ml PBS重悬,即可上机检测。

二、间标法

全血标本(EDTA抗凝)

在Facoll管中加入一定体积的纯化抗体,加入50/100ul全血,混匀,室温孵育15-30分钟(参照说明书)。加入1ml/2ml溶血素,振荡混匀,避光室温孵育10分钟。1000rpm离心5分钟,弃上清,混匀,加入2ml PBS,1000rpm离心5分钟,加入一定体积荧光标记二抗,混匀,室温避光孵育15-30分钟。加入1-2ml PBS,1000rpm离心5分钟,加入0.5-1ml PBS重悬,即可上机检测。

细胞标本(包括红细胞,PBMC,培养细胞及血小板)

在Facoll管中加入一定体积的纯化抗体,加入1×106的细胞,混匀,室温孵育15-30分钟(参照说明书)。加入2ml PBS,1000rpm离心5分钟,弃上清,加入一定体积荧光标记二抗,混匀,室温避光孵育15-30分钟。加入1-2ml PBS,1000rpm离心5分钟,加入0.5-1ml PBS重悬,即可上机检测。

提示:本文“流式细胞术(FC)细胞表面染色操作”属于细胞实验文章,主要介绍流式细胞术方面的知识,内容仅供学习交流与参考。
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