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中生网 > 实验技术 > 细胞实验 > 外源质粒DNA转化大肠杆菌

外源质粒DNA转化大肠杆菌

更新:2013年10月08日 阅读次数: 【字体:


1 实验简介
    转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌 中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.现演示利用化学的方法(热击法):使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体DNA分子导入大肠杆菌细胞中.
    实验中使用的主要仪器:电热恒温水槽  超净工作台台式离心机   电热恒温震荡器  电热恒温培养箱
2 热击
    DNA连接产物与大肠杆菌感受态细胞 冰浴30min后,放置42摄氏度水浴锅中,热击90秒,后迅速将大肠杆菌转移到冰水中放置2-3min.
3 大肠杆菌复苏
    上步热击后,一般都要对菌体进行一次复苏过程,向热击加入600-800 ul37摄氏度预热的无抗生素LB培养基 后,置于摇床 上37氏度,150rpm复苏培养45~60min.
4 涂板培养
    复苏后,收集的菌体去除部分上清液,预留100ul左右的菌液悬浮,用移液枪将重悬的菌加到抗性固体LB培养基中,用涂棒将菌涂布均匀,37摄氏度倒置培养12小时.

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