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中生网 > 实验技术 > 细胞实验 > 体细胞胚诱导

体细胞胚诱导

更新:2013年12月26日 阅读次数: 【字体:
1. 实验材料: 胡萝卜种子。
2. 培养基
2.1 胚性愈伤组织诱导培养基
MS无机盐附加:烟酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激动素0.2mgL-1、2,4—D 0.1mgL-1、蔗糖20gL-1、琼脂2-5gL-1,pH5.8。
2.2 体细胞胚形成培养基
MS无机盐附加:烟酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激动素0.2mgL-1、蔗糖20gL-1,pH5.8。
3. 实验过程
a. 烟草种子以10%次氯酸钙溶液表面消毒15min,用无菌蒸馏水洗3次,置于培养皿内无菌的湿润滤纸上,在25℃下于暗处萌发;
b. 取7日龄幼苗切取下胚轴部位长1cm,单个地置于胚性愈伤组织诱导培养基上,接种好的材料置于25℃温度下黑暗培养4-6周;
c. 将愈伤组织小块转移到与原来成分相同的新鲜培养基上,一半置于于25℃下照光培养,另一半继续在黑暗条件下培养,若以类似方式每4周继代1次,可对组织进行繁殖;
d. 诱导体细胞胚胎发生:将在光照下继代培养的愈伤组织块转移到不含2,4—D的培养基中培养,3~4周后,将出现大量的各处在不同的发育阶段的体细胞胚。
e. 观察体细胞胚的发育过程,统计每个愈伤组织形成的体细胞胚数,统计不同发育时期的体细胞胚占胚总数的比例,分析培养中体细胞胚形成的时间、控制其一致性可能采取得调控措施。
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