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中生网 > 实验技术 > 细胞实验 > 愈伤组织诱导及器官发生

愈伤组织诱导及器官发生

更新:2014年01月19日 阅读次数: 【字体:
1. 愈伤组织诱导
1.1 实验材料:烟草无菌苗叶片
1.2. 诱导培养基:MS附加NAA2.0mg/L,BA2.0mg/L,蔗糖20g/L,琼脂6-7g/L,pH调整至5.8。
1.3. 设备及工具:超净工作台;不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯等;75%酒精。
1.4 接种操作方法
用75%乙醇将净化工作台擦洗干净,将接种所用的材料、工具、培养基等准备好放入工作台。打开紫外灯和风机至少15分钟后开始操作。
a. 在自来水管下将手洗净,然后用75%酒精将手消毒,再进入超净工作台开始接种操作。
b. 关闭紫外灯,点燃酒精灯,将镊子、解剖刀在酒精灯下烤干。
c. 取一无菌培养皿,然后用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用锋利解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,一般每瓶接种4-5小片。
d. 快速封好瓶口,用记号笔写上姓名和接种日期。
e. 接种后的三角瓶置于24℃条件下,黑暗培养一周,然后在同样温度下分为光照和黑暗培养直至愈伤组织形成。
注意外植体切割时,动作要快,否则会造成失水而影响生长。为防止操作时失水也可在培养皿中滴几滴无菌水,然后将无菌苗置于其中进行切割。
2. 器官分化与植株再生
2.1 分化培养基
培养基采用MS基本培养基附加2.0mg/L BA、0.1mg/L Zeatin和0.5mg/l NAA。
2.2 实验材料
实验一诱导的两种类型愈伤组织。
2.3 操作步骤
a. 观察并详细记载实验一的培养结果,比较光照和黑暗条件下形成的愈伤组织状态的差异,根据理论课学习内容,分析其原因,理解培养条件下光照的调控作用。
b. 按照实验一的无菌操作程序,将愈伤组织转入新配制的分化培养基上,置于连续光照或16h/d光照,温度20-22℃条件下培养3-4周。
c. 培养3-4周后,调查芽分化情况,统计愈伤组织分化率、每个愈伤组织形成的芽数,比较不同光照下形成的愈伤组织对芽分化的影响。
相关栏目:实验技术 细胞实验
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