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中生网 > 实验技术 > 细胞实验 > 植物脱毒

植物脱毒

更新:2013年12月27日 阅读次数: 【字体:
1. 植物材料: 马铃薯块茎
2. 实验程序
2.1 材料预处理
a. 选取生长正常,无病虫害危害的马铃薯块茎,在自来水下冲洗干净,漓干;
b. 取一只磁盘,将几层纱布浸湿垫在盘底,将块茎摆在其中,再覆盖浸湿的纱布,然后置于25-27℃黑暗下;
c. 待块茎芽眼萌动,顶芽大约5mm长时,除去覆盖的纱布,将其移入光照生长箱中,其中光照强度为3000~4000 lx,光照时间每天16h,气温白天约为36℃,夜间约为33℃;
2.2 茎尖剥离与培养
a. 经过6周的热处理之后,切取适当长度的芽,按照外植体灭菌方法灭菌。
b. 将双筒解剖镜置于净化工作台上,用75%乙醇将载物台擦洗干净,并用紫外灯照射20min.;
c. 取一无菌培养皿,将灭菌后的芽置于培养皿中,然后置于解剖镜载物台上,左手用镊子固定和调整芽的位置,右手持解剖刀,在解剖镜下将茎尖解剖只剩下2个最幼小的叶原基时,切下茎尖(300-600μm长),接种在含有0.2mg/L BA和0.1mg/L NAA的MS培养基上,在24℃,每天16h光照的条件下培养;
d. 当茎长到3cm甚至更长并已生根时,即可切段繁殖,每一个茎尖的植株单独编号繁殖;
e. 取每一茎尖的部分植株进行病毒检测,经检测后无病毒株保留继续扩繁,其它没有彻底脱毒的植株销毁。
相关栏目:实验技术 细胞实验
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