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中生网 > 实验技术 > 细胞实验 > 组织培养基母液的配制

组织培养基母液的配制

更新:2013年12月26日 阅读次数: 【字体:
  • 仪器及药品
         冰箱、天平(0.0001g)
容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml
广口储液瓶:500 ml、250 ml、50 ml、25 ml
烧杯:1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml
数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺
         标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH
几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品
蒸馏水
二、方法和步骤:
按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下:
大量元素母液:包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉,按表中排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍,分别称取,分别溶解,然后按照顺序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合,应单位定容,最后加上蒸馏水,定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液,配制培养基时,每配1 L培养基需吸取该母液l00 ml或50 ml。
微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成 100倍或1000倍的母液,即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解,混合在一起成为微量元素母液,每配1 L N6培养基需吸取该母液10 ml或者1 ml。
铁盐:在N6培养基中需要单独配制,它是由硫酸亚铁(FeSO4•7H2O)2.78 g和乙二氨四乙酸二钠(Na2-EDTA)3.73 g,分别溶解,混合后,用酒精灯加热半小时以上,冷却后定容至1 L。冰箱过夜贮藏无结晶析出,否则重新配制。每配l升N6培养基需加该铁盐母液5 ml。
有机物质:主要指氨基酸,维生素类物质。它们大都是扩大1000倍,分别称量,分别定容和储存,配制培养基时按需要的量加入。
植物激素:常用的有生长素类如:2,4-D、 萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA);细胞分裂素类:激动素(KT)、6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT)。配制时需要单个称量,根据需要可分别用酸、碱或酒精等不同的溶剂溶解后 ,再用蒸馏水配制成所需的浓度,一般为每ml含 0.1-2 mg,配制培养基时按所需要的量分别加入,本实验中的2,4-D和6-BA均配成1 mg/ml的母液。
在配制吲哚乙酸(IAA)母液时,先用几滴95%酒精溶解完全后,加蒸馏水定容,否则会发生沉淀。而配制6-BA母液时,要用少量的1 mol/L NaOH溶解;而配制2,4-D时,可先用少量的95%酒精溶解。
         表1  N6 朱至清(1975)培养基配方
药品名   配方量(mg/L) 母液倍数 称取量(g/L)
(NH4)2SO4  
 
大量元素
463  
 
10×
4.63
KNO3 2 830 28.3
CaCl2·2H2O 166 1.66
MgSO4·7H2O 185 1.85
KH2PO4 400 4.0
Na2- EDTA 铁盐 37.3 100× 3.73
FeSO4·7H2O 27.8 2.78
MnSO4·4H2O  
微量元素
4.0  
1000×
4.0
ZnSO4·7H2O 3.8 3.8
H3BO3 1.6 1.6
KI 0.8 0.8
盐酸硫胺素(VB1)  
 
有机物质
1  
 
1000×
1.0
烟酸 0.5 0.5
盐酸吡哆醇(VB6) 0.5 0.5
甘氨酸 2.0 2.0
各种母液配制好后,要贴好标签,注明母液的名称,配制1 L培养基需要的吸取量、母液配制的日期,然后放入冰箱中储存。一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年以上,有机物质的母液保存时间在半年以内,但若发现有沉淀或霉变,应立即需重新配制。
 
三、注意事项
  1. 如药品所带结晶水不同,应进行换算。
因常用的MS培养基中硝酸铵(NH4NO3)属于公安部门严格限制管理的药品,所以本实验采用N6培养基替代MS培养基。
相关栏目:实验技术 细胞实验
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