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中生网 > 实验技术 > 细胞实验 > 克隆建库表达专用超级高效感受态细胞

克隆建库表达专用超级高效感受态细胞

更新:2014年02月22日 阅读次数: 【字体:

 

摘要: Stratagene的XL10-Gold®几乎算得上是高效转化的代名词了,研究者一旦要克隆大质粒、连接DNA和建库,克隆甲基化DNA,进行蓝白斑筛选等,首选的就是XL10-Gold®和其衍生菌.

 

 

    国外的同学说一般他们克隆都是直接购买感受态细胞 转化,实验效率很高的.我总是以为如果是一般的克隆实验,自己做感受态好像够用了--如果是建库,购买现成的感受态细胞就是非常必要的首选,因为转化效率确实比实际手工制备的高2-3 个数量级以上,特别是建库,能实实在在地提高实验的效率.实际上,除了建库以外,Stratagene为更好的表达蛋白 、以及转化效率较低的巨无霸质粒,而特别优化了一些感受态细胞,做表达的人其实可以参考一下,有点用处的.在这里借用Merck公司提供的资料供大家参考.
    Stratagene的XL10-Gold®几乎算得上是高效转化的代名词了,研究者一旦要克隆大质粒、连接DNA 和建库,克隆甲基化DNA ,进行蓝白斑筛选等,首选的就是XL10-Gold®和其衍生菌.XL10-Gold®用途包括:
――克隆大DNA:包括表达质粒, 基因组 DNA克隆
――构建质粒文库:减少DNA大小偏倚性,使全长cDNA克隆、双杂交质粒等各种大小的质粒转化效率更接近,提高文库代表性(比DH10B高25倍).
Hte 基因型
    Hte(高效转化)基因型是Stratagene开发的特异性提高大质粒、连接DNA的宿主菌基因型,并使细胞生长 加快(当天获得菌落),已经成功应用于 25kb超螺旋DNA和8kb连接DNA的克隆.XL10-Gold®,BL21-Gold,BL21-CodonPlus®,SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列细胞都带有这个新的性状.
超级感受态细胞
    Stratagene提供多种>5 x 109 转化子/μg 超螺旋DNA转化效率的化学法超级感受态细胞正是克隆获得大质粒、连接DNA克隆和建库时最值得推荐的.
电转化感受态细胞
    Stratagene的电转化感受态细胞特别耐受电击处理,方便好用,在DNA材料极珍贵、量少时,或构建有代表性文库时,建议采用电转化感受态细胞.ElectroTen-Blue®细胞是目前商品化的电转化感受态细胞中效率最高的,达到>3 x 1010 转化子/μg 超螺旋DNA.此外XL1-Blue,XL1-Blue MRF’,SURE®,ABLE® 和TG1等细 胞也提供电转化形式感受态细胞.
SURE® -克隆不稳定 DNA
    大肠杆菌DNA修复 系统会针对重复序列、二级结构(如Z-DNA)等真核DNA进行重排或删除修饰.SURE感受态细胞针对uvrC,umuC,SbcC 和RecJ等参与修饰的大肠杆菌基因或蛋白进行突变 ,提高了真核来源、不规则DNA的稳定性达20倍以上,并且适合克隆甲基化DNA.提供化学和电转化感受态细胞,效率分别达1x1010 和1x109 .

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