1.了解植物组织中叶绿素的分布及性质。
2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。
二、实验原理
叶绿素广泛存在 于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下 叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素A和B，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：
1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。
2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
叶绿素A和叶绿素B在645nm 和663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。因此测定提取液在645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可分别计算出叶绿素A、叶绿素B和总叶绿素的含量。
三、仪器、原料和试剂
仪器：分光光度计、电子顶载天平(感量0．01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。
原料：新鲜(或烘干)的植物叶片。
试剂：1. 96%乙醇(或80％丙酮)、2. 石英砂、3. 碳酸钙粉
四、操作步骤
①、取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，去除中脉剪碎。
②、称取剪碎的新鲜样品2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3Ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10Ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
③、取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至100mL 棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
④、用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至100Ml，摇匀。
⑤、取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm 和652nm 下测定吸光度，以95％乙醇为空白对照。
五、计算
按照实验原理中提供的经验公式，分别计算植物材料中叶绿素A、B和总叶绿素A的含量。
叶绿素A=（12.7A665-2.69A645）×【V/（1000×W）】
叶绿素B=（12.7A645-2.69A665）×【V/（1000×W）】
总叶绿素A=（20.0A645+8.02A665）×【V/（1000×W）】
或
总叶绿素A=（A652/34.5）/【V/（1000×W）】
