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ELISA测定之竞争法测抗原

更新:2011年01月11日 阅读次数: 【字体:

大分子抗原因其具有两个以上的抗原决定簇,而可用双抗体夹心法测定,小分子半抗原如地高辛、茶碱等药物以及T3、T4及睾酮等激素因其只有一个抗原决定簇,从而无法使用双抗夹心方法测定,只能采用竞争抑制法测定。具体步骤如下:

1.先用抗小分子的特异抗体如双抗体夹心法一样包被固相并封闭。

2.同时加入待测样本和酶标的小分子,温育一定时间后洗板;此步中,待测样本的小分子将与酶标小分子竞争与固相上特异抗体结合。

ELISA测定之竞争法测抗原

3.加入酶底物,温育显色测定,显色的强弱与待测样本中的小分子含量成反比(如上图)。

ELISA测定之竞争法测抗原

这种测定模式中,需要得到小分子与酶的结合物,而小分子酶结合物一则在制备上不如抗体酶结合物简便,二则其纯化亦颇为困难,结合有小分子的酶与游离酶之间难于分离。因此,有人尝试在合成二或多聚体小分子的基础上,建立双抗夹心竞争ELISA方法测定小分子,测定的灵敏度和特异性均有所提高(如上图)。

关键词:ELISA 竞争法
相关栏目:遗传免疫 ELISA
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