中生网|生物技术|生物网址|生物软件|实用工具 |本站导航

生物新闻

-

实验技术

-

软件教程

-

论文考试

-

肿瘤癌症

-

检验知识

-

仪器使用

-

健康知识

中生网 > 实验技术 > 微生物实验 > 细菌形态检查法

细菌形态检查法

更新:2015年04月30日 阅读次数: 【字体:

细菌形态学是研究细菌的一个重要方面,了解细菌的形态和结构对研究细菌的生理活动、致病性和免疫性,以及鉴别细菌、诊断疾病和防治细菌性感染等均有重要的理论和实际意义。由于细菌个体微小,常以微米(μm)为测量单位,肉眼不能直接看到,必须借助显微镜放大后才能观察。根据不同的研究目的和要求,可分别选择普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。另外,由于细菌呈半透明状,要想更清楚地观察其大小和形态,需要进行染色。显微镜检查有不染色标本检查法和染色标本检查法两种。
  一、不染色标本检查法
不染色标本主要用于检查活菌的动力及运动状况。细菌未染色时无色透明,在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。有鞭毛的细菌运动活泼,无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。梅毒苍白密螺旋体、钩端螺旋体、弯曲杆菌等的活菌各有特征鲜明的形态和运动方式,具有诊断意义。常用方法有压滴法或悬滴法,置于普通光学显微镜或暗视野显微镜下观察。
1. 压滴法 取菌液一滴,置于清洁载玻片中央,覆上盖玻片,于高倍镜下观察。制片时菌液要适量,不可有气泡,不可外溢。这是观察细菌动力的一种简便方法。
2. 悬滴法 取洁净的凹窝载玻片及盖玻片各1块,将凹孔四周的平面上涂上一层凡士林,取一个环菌液置盖玻片中央,将凹窝载玻片的凹面向下,对准于盖玻片的液滴上,然后迅速翻转玻片,用小镊子轻压盖玻片使之与凹孔边缘粘紧。镜下观察时先低倍后高倍,不可压碎盖玻片。有动力的细菌可见细菌从一处移到另一处,无动力的细菌呈布朗运动而无位置的改变。
3. 暗视野荧光法 由于细菌微小而且半透明,不染色时在普通显微镜下不易看清楚,如使显微镜视野变暗,使菌体发亮,则更容易观察。
  二、染色标本检查法
细菌个体微小呈半透明状,经染色后才能观察的较清楚。通过对标本染色,能观察细菌的形态、大小、排列、染色特性以及荚膜、芽孢、异染颗粒等结构,有助于细菌的初步鉴定。实验室所用的染液都是苯的衍生物,如结晶紫、美蓝、孔雀绿等,是人工合成的染料,它们带色基团与染料分子中含有的不饱和双键有关,含双键的部位的化学性质极不稳定,所以容易吸收光线而显色。而细菌的等电点比较低,一般在pH2~5之间,如果在中性、碱性或弱酸性溶液中,整个菌体带的是负电荷,容易被碱性染料染上色,这些染料对菌体的核蛋白或细胞壁的成分有特别的亲和性。常用的染色法有单染法和复染法两种:①单染法:只用一种染料染色,可观察细菌的形态、大小和排列情况,但不能用于细菌的鉴别。操作过程:涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检。 ②复染法:用两种或两种以上的染料染色,可将细菌染成不同的颜色,除可以观察细菌的形态外还能显示出细菌的特殊结构,在细菌的鉴别上有一定的意义。常用的有:
1. 革兰染色法 细菌的革兰染色是最常用的鉴别染色法,由丹麦细菌学家革兰于1884年创建,根据其染色结果将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
操作过程:涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检。
染色具体方法为:初染:用结晶紫,染色1分钟,水洗。媒染:加碘液覆盖1分钟后水洗。脱色:连续滴加95%乙醇,约30秒,直到滴下的乙醇无色为止,水洗。复染:加番红染色1分钟,水洗。
2. 芽孢染色
(1)原理: 细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚,致密,透性差,着色和脱色都比营养细胞困难,故一般采用一种碱性染料并在微火上加热,或延长染色时间,使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料,芽孢仍保留颜色,再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色,如此可明显区分芽孢和营养体结构。
(2)操作:
①用枯草杆菌涂片、干燥、固定。
②在涂菌处滴加5%的孔雀绿染液,用木夹夹住玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但不沸腾5~6 min。加热时应添加染料,以免蒸干。水洗。
③0.5%番红复染1分钟,水洗,烘干,镜检(芽孢绿色,菌体红色)。
3. 荚膜染色
(1)原理: 荚膜与染料亲和力低。在用简单染色法时,可以辨认出来。而通过荚膜染色也可以把它和细胞区别开来。
操作:
①涂片,晾干。②用Tyier氏醋酸结晶紫溶液染色2分钟,再用20%硫酸铜溶液洗涤,水洗,用滤纸吸干、干燥。③镜检:荚膜染成浅红色,细胞呈紫红色。
4. 鞭毛染色法
(1)原理: 细菌鞭毛直径为10~12nm,超过了光学显微镜的分辨能力。所以染色时,不仅要使鞭毛染色,还要使一部分染料堆积在鞭毛上,加粗鞭毛的直径以便能观察。鞭毛染色的方法很多,但染色成功的关键一是必须使用新鲜培养、活动活泼的菌体进行染色;二是使用绝对无油的干净玻片,以便菌液流过玻片时能保持自然形态。细菌的运动性,可通过悬滴法制片观察。注意区分布朗运动和细菌本身的运动。
(2)操作:染色液配制如下。
甲液:①明矾饱和水溶液 2ml;5% 石炭酸水溶液 5ml;20%鞣酸水溶液 2ml;②碱性复红水溶液 1ml。
染色前①液与②液混合后,过滤使用。
乙液:美蓝0.1g,硼砂1g,蒸馏水溶解,定容至100ml。
染色:将制备的涂片自然干燥后,滴加甲液染色3分钟,细小流水洗去染液,用乙液复染0.5~1min,细小流水洗去染液,自然干燥。
镜检:菌体呈蓝色,鞭毛呈红色。
5. 抗酸染色法
(1)原理:分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高,主要是分枝菌酸,一般不易着色,若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色。这种针对分枝杆菌的特殊的染色法称为齐尼(Zieh-Neelsen)抗酸染色法。
(2)操作:①结核病人痰涂片,干燥、固定。②滴加数滴石炭酸复红染液,酒精灯外焰上方微微加温至冒蒸汽时,维持3~5min,勿煮沸、烧干,染液要干时随即添加。小心水洗洗净染液。③滴加3%盐酸酒精数滴,脱色半分钟至1min,水洗。④滴加碱性美兰复染0.5~1min,水洗,晾干。⑤油镜镜检:分枝杆菌呈红色,细长稍弯曲。而其他杂菌和细胞均呈蓝色。
细菌的染色尚有多种方法,如异染颗粒染色法可用于观察细菌中的异染颗粒;Fontana镀银染色法可用于螺旋体的染色检查;Giimenza染色检查立克次体等等。

 以下是对 [细菌形态检查法] 的评论,总共:0条评论
中生网-生物软件-生物技术-生物网址-实验技术-本站导航-联系我们-收藏本站
©中生网-提供生物软件免费下载,生物实验Protocol,生物网址导航。
Copyright (C)2005-2015 www.seekbio.com All Rights Reserved.