三、miRNA荧光定量PCR基本原理
实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光试剂，利用荧光信号实时检测PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度。但是就成熟的microRNA而言，由于其是由21-25个核苷酸组成的小RNA，长度太短，并不能通过传统的实时定量PCR进行检测,但是通过特殊设计的茎环结构的反转录引物，配合实时定量PCR引物及探针可以精确检测微量样品中microRNA表达水平，也可以用终点PCR法定性检测。
图二 miRNA 实时荧光定量PCR原理
虽然 microRNA 实时定量PCR是一种最近才发展起来的检测技术，其技术细节还在不断完善中,但是microRNA 实时定量PCR检测系统，相对其它microRNA检测技术有以下优点：
1.高特异性 , 可以只对成熟 microRNA 进行定量，有效区分成熟 microRNA 分子和前体分子以及其它成熟 microRNA 的同源分子；
2.快速，简单，省时，整个操作只需两步，不到 3 个小时，即可获得高质量的数据；
3.检测灵敏度高，样品消耗少，仅需 1-10ng 的总 RNA 或 50pg 左右的 microRNA ；
4.超宽的线性范围，可跨越 7 个数量级；
图三 人的脑(B)），心脏(H)和肝脏(R)组织中microRNA表达情况：分别采用实时定量PCR，终点法PCR和Northern Blot检测，RNA用量和时间见图。
