聚焦层析也是层析柱层析。因此，它是一样的其他色谱法，像往常一样为流动相，流动相为多缓冲区，缓冲区内固定的交换代理。重点的原则，解决色谱pH梯度的形成蛋白质的行为和把重点放在三个方面的影响。
1、pH梯度的形成解决方案
在离子交换层析， pH梯度取决于混合形成的解决方案实现了梯度仪。例如，当使用阴离子色谱代理人，准备以低pH值高线性梯度变化的方法，解决办法是，在混合室梯度（本专栏的）显然是管理加载高pH值的解决办法，而在另一些国家的pH值安装在一个房间的低限的解决方案，然后打开底部的柱层析出口，从而使连续流动洗脱液缸。然后从低栏的解决办法的一部分的上半部分的pH值高向低变化。色谱重点，当洗脱液到一个缓冲区交换多个代理商，由于交换剂的缓冲能力与荷基电气公司， pH值可自动形成一个梯度的解决办法。
例如，当该列阴离子交换剂显然管理加载PBE94 （为固定相） ，第一次启动平衡缓冲胃病，多使用缓冲区PH6含有（为流动相）的淋洗液通过列，其中缓冲区时，最强烈的酸性和碱性成分相结合的阴离子交换了地位和作用。淋洗液的不断增加，人民生活在PH值的每一个点的逐步下降，从高向低。 J至做同样的处理时间，从该部的色谱上方，最终形成一个梯度PH6 〜 9 。重点的pH色谱梯度解决在浸出过程是自动的，但进行浸出， pH梯度迁移将逐渐从流出的液体底部的pH值逐渐降低至6 9 ，最后，这恒定值，那么pH梯度色谱也消失了。
2 、蛋白质行为
蛋白质所带来的费用在其等电点（ PI ）的柱层析的pH值。当列低于pH值皮蛋白，该蛋白正电荷，而不是远离交流银约束力。并向前迈进的eluant ， pH值固定阶段，浸出时间和变化。当蛋白质的举动时，对环境的pH值高于皮，蛋白质的正电与负电荷接轨，并结合阴离子交换剂。由于通过环境eluant蛋白的PI低于当pH再次，它正电荷，并从交换剂解吸。随着洗脱液的栏结束时迁移，这一过程将重复，因此，各种蛋白质的等电点已被冲走，从而实现目的的分离。
不同的蛋白质有不同的等电点，他们结合离子交换剂之前移动的距离不同洗脱的顺序是根据等电点的秩序。
