用活体ESR法检测NO操作步骤

I. 用DTCS Na制备Fe-(DTCS)₂

1. 试剂 

·DTCS Na

·七水硫酸亚铁 (FeSO₄.7H₂O)

·蒸馏水或pH7以上的缓冲液

2. 操作

1) 用通氮气30分钟以上的蒸馏水溶解七水硫酸亚铁。

2) 将DTCS Na溶解于蒸馏水或pH7以上的缓冲液中，通氮气30分钟以上。加入第1) 步的溶液 

(DTCS Na: 铁=5: 1，溶液的颜色变褐色)

* 由于Fe2+-(DTCS)₂在水溶液中不稳定，所以需要现配现用。

* Fe2+螯合物溶液在无氧条件下是无色的，但是通常在通氮气后变为褐色。这可能是形成Fe3+螯合物的原因，但是铁螯合物也可以捕捉NO。请注意DTCS Na会在pH7以下逐渐分解释放出二硫化碳。

II. 用DTCS Na制备NO-Fe2+-(DTCS)₂

1. 试剂

·DTCS Na

·七水硫酸亚铁 (FeSO₄.7H₂O)

·蒸馏水或pH7以上的缓冲液

·NO 气体

·氮气或氩气

2. 操作

1) 以下操作须在氮气或氩气下进行，由于处理过程中有NO气体，需要保持通风。配制所需浓度的七水硫酸亚铁水溶液，通NO气体15分钟，然后在通NO气的条件下加入DTCS Na (铁：DTCS Na=1: 2)

2) 加入DTCS Na后，通NO气体5分钟，然后通氮气或氩气驱走过量的NO气体。

3) 用密封的注射器吸取需要的溶液。

* 该溶液可在无氧条件下长时间稳定地存放几个月，也可以冷冻保存，由于在有氧条件下会慢慢氧化，所以最好是在通氮气条件下现配现用。