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实验技术 > 分子生物学实验 > 分子生物技术 > 重组体分子的选择与鉴定

重组体分子的选择与鉴定

最后更新:2010-5-25 阅读次数: 【字体:

“选择”(selection)和“筛选”(screening)的基本含义。
选择,是指通过某种外来附加压力(或因素)的辨别作用,呈现具有重组DNA分子的特定克隆类型的一种方法。选择所涉及的范围较为广泛,包括根据克隆载体提供的表型特征的简单选择(simple selection),和根据突变的互补作用对克隆基因的直接选择(direct selection)。
筛选则是指通过某种特定的方法,从被分析的细胞群体或基因文库中,鉴定出真正具有所需要重组DNA分子的特定克隆的过程。

一.遗传检测法

(1)根据载体表型特征选择重组体分子的直接选择法
基因工程中使用的所有的载体分子,都带有一个可选择遗传标记或表型特征。遗传选择法使我们能够将重组体的DNA分子同非重组体的亲本载体分子区别开来。
(i)抗药性记号插入失活选择法


pBR322质粒具有编码有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr),只要将转化的细胞培养在含有四环素或氨苄青霉素的生长培养基中,便可以容易地检测出获得此种质粒的转化子细胞
(ii)β-半乳糖苷酸显色反应选择法


根据插入失活原理,将外源DNA插入到它的lacZ基因上所造成β-半乳糠苷酶失活效应,可以通过大肠杆菌转化子菌落在Xgal-IPTG培养基中的颜色变化直接观察出来。β-半乳糖苷酶会把乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。
(2)根据插入序列的表型特征选择重组体分子的直接选择法
这种选择法依据的基本原理是,转化进来的外源DNA编码的基因,能够对大肠杆菌寄主菌株所具有的突变发生体内抑制或互补效应,从而使被转化的寄主细胞表现出外源基因编码的表型特征。

提示:本文重组体分子的选择与鉴定属于分子生物技术文章,主要介绍重组体方面的知识,内容仅供学习交流与参考,不代表中生网的观点。
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