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实验技术 > 分子生物学实验 > RNA实验 > RNA提取纯化实验注意事项

RNA提取纯化实验注意事项

最后更新:2011-1-6 阅读次数: 【字体:

RNA抽取纯化是分子生物学研究的基本工作之一,但是由于RNA分解酵素的广泛存在及其难以消灭的顽强特性,使得RNA的抽取纯化和后续工作极为困难。虽然各类RNA抽取纯化套件的广泛应用使得RNA抽取和纯化不再特别困难,但是涉及RNA的工作仍然是分子分生物学研究中最让人头痛的一个项目。为了确保RNA的研究工作能够成功,请您参考下列注意事项,相信它能帮助您解决常见的问题。

归根究底,RNA工作的主要问题是防止RNA分解酵素的污染。RNA分解酵素无处不在,在实验操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不当操作都有可能造成RNA分解酵素污染,从而导致整个实验失败。因此,严格控制实验条件,避免任何可能的污染是保証实验成功的关键。因此必须做到以下几点:

1.如果可能,实验室应专门分出RNA操作区,离心机、分注器、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁,并定期进行消毒。

2.操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套,并经常更换,以避免将手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA分解酵素带入试管或污染用具。尽量避免使用抛弃式塑胶手套。塑胶手套不但常常造成不便,且塑胶手套的多出部分常常在器具上遭RNA分解酵素污染处和未污染处间传递分解酵素,扩大污染。

3.尽量使用抛弃式塑胶製品,尽量避免共用器具如滤纸、吸管尖、离心管等,以防止交叉污染。例如,部分RNA的研究经常需要使用RNase H、T1等,在操作过程中极有可能造成分注器、离心机等的污染。而这些污染了的器具正是RNA实验的大敌。

4.配制溶液用的酒精,异丙醇、Tris等应採用未开封的新品。

5.抛弃式塑胶製品部分,建议使用出厂前已经灭菌的吸管尖和离心管。多数厂商供应的无菌塑胶製品很少有RNA分解酵素污染,买来后可直接用于RNA操作。许多研究者用DEPC等处理的塑胶製品,往往由于二次污染而带有RNA分解酵素,从而导致实验失败。

6.所有玻璃製品都必须在150℃烘烤4小时。所有旧塑胶製品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟,并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌。无法用DEPC处理的用具可以用氯彷擦拭若干次,这样通常可以消除RNA分解酵素的活性。

提示:本文“RNA提取纯化实验注意事项”属于RNA实验文章,主要介绍RNA提取RNA纯化方面的知识,内容仅供学习交流与参考。
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