全氮和粗蛋白测定法
Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87
crude protein
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本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。
1 仪器
a. 分析天平:感量0.1mg;
b. 凯氏烧瓶;
c. 铁架、铁圈、石棉网;
d. 煤气灯(或电炉);
e. 干燥管、抽气管、橡皮管;
f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;
g. 粉碎机等。
2 试剂与溶液
2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
甲基红40mg,溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中。
2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂
硫酸铜 : 硫酸钾 = 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯)。
2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。
2.4 4%硼酸溶液
称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL。
2.5 浓硫酸 (分析纯)
2.6 40%氢氧化钠溶液
称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100mL。
2.7 0.1N盐酸标准溶液
量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。
2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,
每份重约0.17g,称准至0.0002g。分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL,
温热摇动,使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 2 滴,然后用待标定的盐酸
溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V)。
计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算
G
N = ━━━━━━ …………………………………… (3)
V ×0.05299
式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度;
G——无水碳酸钠之重量,g;
V——盐酸溶液之用量,mL;
0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g。
2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥
形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在30s内不退色为终点。
记下耗用mL数。
计算:
N NaOH×V NaOH
盐酸当量 = ━━━━━━━━ …………………………………(2)
25
式中:N NaOH——已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度;
V NaOH——氢氧化钠溶液的滴定量,mL;
25——待标定盐酸吸取量,mL。
2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000N,可根据初标定浓
度加水或盐酸,多次标定后最终达到。为操作简便,可使用2.7.2法,最后用2.7.1法标定。
