一、核酸的化学组成
组成核酸的元素有c、h、o、n、p等,其中n含量约为15%~16%,磷含量为9%~10%。由于核酸分子中的磷含量比较恒定,因此,核酸定量测定的经典方法,是以测定磷含量代表核酸量。
核酸经水解可得到多核苷核,因此核苷酸是核酸的基本单位,核酸就是由很多单核苷酸聚合形成的多核苷酸,核苷酸可被水解产生核苷和磷酸,核苷还可进一步水解,产生戊糖和含氮碱。因此,核酸是由含氮碱、戊糖及磷酸三种成分组成。
含氮碱(简称碱基):核酸中的含氮碱简称碱基,是嘌呤碱(purine)与嘧啶碱(pyrimidine)的衍生物。rna和dna含有的共同碱基成分是腺嘌呤(adenine, a)、鸟嘌呤(guanine, g)和胞嘧啶(cytosine, c)。二者的区别是rna含有尿嘧啶(uracil, u),而dna含有胸腺嘧啶(thymine, t)。嘌呤和嘧啶都有酮-烯醇式互变异构现象,一般生理ph条件下呈酮式。它们的结构如下:

有些核酸中含有修饰碱基(或稀有碱基),这些碱基大多是在上述嘌呤或嘧啶碱的不同部位甲基化(methylation)或进行其它的化学修饰而形成的衍生物。例如有些dna分子中含有5-甲基胞嘧啶(m5c),5-羟甲基胞嘧啶(hm5c)。某些rna分子中含有1-甲基腺嘌呤(m1a)、2,2-二甲基鸟嘌呤(m22g)和5,6-二氢尿嘧啶(dhu)等。
嘌呤碱和嘧啶碱一般多不易溶于水,对250~280nm波长的紫外光有较强的吸收,但对260nm光波的吸收能力最大。由于碱基是核酸的基本组成成分,因此,所有的核酸(包括dna和rna)其共同特点是对260nm处的紫外光有最大的吸收值。
核酸分子中碱基的克分子数与磷的克原子数相等,所以可根据核酸溶液中的磷含量及紫外光的吸收值来测定核酸量。一般以每升核酸溶液中含1g磷原子为标准来计算核酸的吸光率,这称为克原子磷吸光率或克原子磷消光系数[ε(p)],ε(p)的计算式为:
ε(p)=a/cl
a为吸光度(光密度),1为比色杯内径,通常为1.0cm;c为每升核酸溶液中磷的克原子数。
c= 每升溶液中磷重(wg)/30.98 ε(p)= 30.98a/wl
一般dna的ε(p)=6000~8000; rna为7000~10000
现将dna和rna的化学组成归纳如表18-1:
表18-1
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rna |
dna | |
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嘌呤碱 |
腺嘌呤鸟嘌呤 |
腺嘌呤鸟嘌呤 |
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嘧啶碱 |
胞嘧啶尿嘧啶 |
胞嘧啶胸腺嘧啶(或5-甲基胞嘧啶) |
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戊糖 |
核糖 |
脱氧核糖 |
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磷酸 |
磷酸 |
磷酸 |
二、核酸的一级结构
核酸又称多核苷酸,组成dna的脱氧核糖核苷酸主要为四种,即damp、dgmp、dcmp及dtmp;组成rna的核糖核苷酸主要有amp、gmp、cmp及ump四种。对两种核酸的组成可简写如下:
dna=(碱基-脱氧核糖-磷酸)n;rna=(碱基-核糖-磷酸)n
核酸中核苷酸的连接方式为:一个核苷核c-3’上羟基与下一个核苷核酸c-5’连接在磷酸羟基脱水缩合成酯键,称酯键称3’5’磷酸二酯键,若干个核苷酸间依3’5’磷酸二酯键连接成长链的大分子即为核酸。此长链称多核苷酸链,在链的一核苷酸,其c-5’连接的磷酸只一个酯键,称此核苷酸为链的5’磷酸未端或5’。链的另一端核苷酸上c-3’上羟基是自由的,对此核苷酸称为3’羟基末端或3’端,链内的核苷酸在c-5’上磷酸已形成二酯键,c-3’上羟基也已参与二酯键的形成,故称核苷酸残基。
核酸的一级结构乃指其核苷酸链中核苷酸的排列顺序,由于核酸中核苷酸彼此之间的差别乃在于碱基部分,故核酸的一级结构即指核酸分子中碱基的排列顺序。
对核酸一级结构的描述为:将5’磷酸末端书于左侧,中间部分为核苷酸残基,3’羟基末端书于右侧。通常用竖线表示核糖,碱基标于竖线上端,竖线间有含p的斜线,代表3’,5’磷酸二酯键。此表示法及简化式如下:


