病毒在体外受到物理、化学因素作用后能失去感染性称为灭活（inactivation）。灭活的病毒仍能保留其他特性，如抗原性、红细胞吸附、血凝及细胞融合等。理化因素灭活病毒的机制是通过破坏病毒的包膜（如脂溶剂或冻融）使病毒蛋白质变性（如酸、碱、甲醛、温热等）及损伤病毒的核酸（变性剂、射线）等。病毒对理化因素的敏感性的强弱因病毒种类而异。了解理化因素对病毒的影响，在预防病毒感染、分离病毒及疫苗制备等方面均有意义。
一、物理因素的影响
温度 大多数病毒耐冷不耐热。在干冰温度（-70℃）或液氮温度（-196℃）条件下，病毒感染性可保持数月至数年。保存病毒需用低温，但反复冻融也可使病毒失活。对温度的敏感性因病毒而异，多数病毒加热60℃30分钟或100℃数秒钟可被灭活，但乙型肝炎病毒需100℃10分钟才能灭活；有包膜的病毒比无包膜病毒更不耐热。
酸碱度 多数病毒在pH5～pH9稳定，但也因病毒种类而异。肠道病毒在pH3～pH5时稳定，而鼻病毒在pH3～pH5则迅速被灭活。因此，可利用对pH的稳定性来鉴别病毒。
射线 X线、γ射线或紫外线均能以不同机制使病毒灭活。射线可使核苷酸链发生致死性断裂；而紫外线能使病毒基因核苷酸结构发生改变，形成胸腺核苷与尿核苷双聚体，从而抑制病毒DNA或RNA的复制。但有些病毒，如脊髓灰质炎病毒经紫外线灭活后，再用可见光照射，可因除去双聚体而复活，称为光复活（photoreactivation），故不宜使用紫外线来制备灭活疫苗。
二、化学因素的影响
脂溶剂 乙醚、氯仿、去氧胆酸盐、阴离子去污剂等脂溶剂均可使有包膜病毒（如流感病毒、流行性乙型脑炎病毒等）的包膜脂质溶解而被灭活，失去吸附能力。但对无包膜病毒（如肠道病毒）几乎无作用。因此，可用耐乙醚试验鉴别病毒有无包膜。
消毒剂 除强酸、强碱能灭活病毒外，次亚氯酸盐、过氧乙酸、戊二醛、甲醛、氧化剂、卤素及其化合物等化学消毒剂均能使大多数病毒灭活。病毒对消毒剂的抵抗力比细菌强，特别是无包膜的微小病毒。病毒对消毒剂的敏感性也因病毒种类而异。醛类消毒剂虽能使病毒灭活但仍能保持抗原性，故常用甲醛作灭活剂制备灭活疫苗。
其他 现有的抗生素对病毒无抑制作用。中草药如板蓝根、大青叶、大黄、贯仲和七叶一枝花等对某些病毒有一定的抑制作用。
MgCl2、MgSO4、Na2SO4等盐类对小RNA病毒科、疱疹病毒科和正粘病毒科等病毒有稳定作用，能提高病毒对热的抵抗力，可耐受50℃ 1小时。为此在保存这些病毒时经常加入镁盐，以延长病毒保存期。
