第六节 新近发现的肝炎相关病毒
目前，除公认的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎外，仍然有相当比例的急、慢性输血后肝炎，散发性、暴发性肝炎病因不明，统称为非甲～戊型肝炎。GB病毒-C(GB virus-C，GBV-C)/庚型肝炎病毒（HG virus，HGV）和TT病毒（TT virus，TTV）是最近从输血后非甲～戊型肝炎病人中发现的新病毒，最初都被认为可能是非甲～戊型肝炎的病因。随着研究的深入，发现其对肝脏和肝外的致病性尚不能确定。并且，越来越多的证据表明GBV-C/HGV或TTV的感染在一定情况下可能对人体有利无害。基于GBV-C/HGV和TTV的上述特点及研究近况，从其分离的来源考虑，统称为新近发现的肝炎相关病毒（hepatitis-related viruses）。
一、GB病毒-C/庚型肝炎病毒
1995年，美国科学家从接种GB病人血清的狷毛猴（tamarin）中发现了2个RNA病毒样序列，命名为GBV-A和GBV-B。用二者的重组蛋白建立ELISA技术及代表性差异分析（representotinal difference analysis，RDA）技术，从一名GBV抗体阳性的非甲～戊型肝炎患者中，扩增到人的GBV-A和GBV-B样的核酸序列，命名为GB病毒-C（GBV-C）。随后，美国另一组科学家也从一名输血后非甲～戊型肝炎病人中克隆到上述类似的序列，暂称为庚型肝炎病毒（HGV）。GBV-C和HGV的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为85%和95％，因此认为二者是同一种病毒的不同分离株。其正式命名有待最后确定。
生物学特性 GBV-C/HGV为直径小于100nm的有包膜的单股正链RNA病毒，蔗糖密度梯度为1.07g/ml～1.09g/ml，迄今尚未在电镜下观察到其形态。目前认为HGV是黄病毒科中的一个新属，结构与HCV相似，基因组长约9.4kb，由编码区和非编码区(UTR)两部分组成。其5’端和3’端分别为非编码区，二者间有一个完整的开放读框（ORF）。ORF的5’端为结构区，3’端为非结构区，其编码一个约2900个氨基酸的前体蛋白，经病毒和宿主细胞蛋白酶水解后，形成相应的病毒结构蛋白和非结构蛋白。
GBV-C/HGV 5’- UTR富含茎环和发夹结构，可能与病毒的复制有关。此外，UTR内某些区域的核酸序列高度保守，可用来优化设计PCR引物，以提高GBV-C/HGV检测的敏感性。
GBV-C/HGV的C区相对较短，据报道有相当数量的分离株甚至缺少核心区，这是GBV-C/HGV有别于黄病毒科中其它成员的不同点。GBV-C/HGV的包膜E2蛋白较为保守，缺乏HCV样的高变区。
GBV-C/HGV至少有3个主要的基因型（genotype），即非洲型、美国型和亚洲型。且各基因型按其命名呈一定的地理分布。
GBV-C/HGV可感染狨猴和狷毛猴，并可连续传代。我国有用GBV-C/HGV RNA阳性血清实验感染猕猴获成功的报道。此外，GBV-C/HGV的细胞培养尚未见报道。
致病性和免疫性 GBV-C/HGV的传染源主要是病毒感染者或携带者。灵长类动物虽可感染GBV-C/HGV，但其自然感染情况及其作为传染源的意义尚不清楚。
GBV-C/HGV主要经血传播，受血者、静脉内毒瘾者、接触血液的医务人员等GBV-C/HGV感染率高。此外，还存在母-婴传播方式。GBV-C/HGV多为持续感染，单独感染者不引起明显的肝损伤及相应的临床症状。由于传播途径相同，GBV-C/HGV常与HBV、HCV和HIV等联合感染。联合感染中，GBV-C/HGV并不加重乙型和丙型肝炎的临床症状和肝脏酶学变化，有研究表明合并GBV-C/HGV感染的HCV感染者中，有些病人的HCV感染消失，ALT恢复正常，而GBV-C/HGV感染持续存在；合并感染GBV-C/HGV的HIV感染者中者常表现为CD4+细胞计数较高，故AIDS病程进展较为缓慢。此外，目前的资料显示肝脏并不是GBV-C/HGV复制的主要部位。
人感染GBV-C/HGV后可刺激机体产生抗包膜E2蛋白的抗体。感染者中GBV-C/HGV RNA阴转的同时E2抗体开始出现，且两种标志物的含量相互呈反比关系，该抗体可能是中和抗体，可反映机体既往感染的情况。
微生物学诊断 目前GBV-C/HGV感染的诊断主要用RT-PCR，用5’-UTR、3’-UTR、NS3区和E2区等衍生的引物进行套式PCR法，扩增待检标本中的GBV-C/HGV目的基因片段。因UTR特定区域的核酸序列高度保守，用故该区域衍生的PCR引物进行套式PCR扩增灵敏度和特异性都更高。但RT-PCR不能表明GBV-C/HGV的既往感染和血清学转化规律。
最近，应用CHO细胞表达的重组GBV-C/HGV包膜E2多肽抗原，建立了ELISA技术检测血清中E2抗体。因E2抗体的出现与GBV-C/HGV RNA的消失相关，因此目前认为E2抗体阳性标志着GBV-C/HGV感染的恢复和既往感染情况。
对GBV-C/HGV的生物学特性和致病性等问题的认识是一不断发展的过程，随着研究的深入，越来越多的证据表明GBV-C/HGV可能对人体无害，有学者认为GBV-C/HGV是一个“旁观者”或为人体的“正常病毒群”，这一点与TTV似乎是相同的。GBV-C/HGV感染对人体究竟有何意义，这方面的工作亟待进一步研究认识。
二、TT病毒
继发现GBV-C/HGV后，1997年日本学者Nishizawa等从一名输血后非甲～庚型肝炎病人（T. T.）中发现了一种新病毒，依照病人姓氏缩写命名为TT病毒（TT virus， TTV）。TTV拥有一庞大的成员，除原始株TA278外，还发现许多与TTV相关的新病毒株，如PMV、SANBAN病毒、YONBON病毒、SEN病毒、JT33株以及TTV-like mini virus(TLMV)等。从系统发生学和基因结构分析表明，除TLMV外，近年报道的与TTV相关的新病毒株均为TTV的变异株，本文统称为TTV一并叙述。
生物学特性 TTV是一种无包膜的单股环状负链的球形DNA病毒，直径为30 ～32nm，在氯化铯中浮力密度为1.31～1.35g/ml。TTV基因组长3.6kb～3.8kb，由编码区和非编码区(UTR)两部分组成，非编码区特定区域内核酸序列十分保守，此区域可能与病毒的复制及蛋白质的表达有关；利用该区域优化设计PCR引物可大大提高TTV DNA的检出率。
目前认为TTV结构区至少有4个ORF。ORF1编码的可能为病毒的衣壳蛋白，其中部有3个高变区，可能与病毒逃避机体的免疫监视，在体内持续感染有关。有关ORF2、ORF3及ORF4编码的蛋白质功能目前尚不清楚。
TTV基因组DNA呈高度的异质性。有学者根据ORF1的全核酸序列差异将不同的变异株分为5大基因群（genetic group），共计34种基因型（genotype），其分群情况如图37-12所示。虽然TTV各基因群间核苷酸异质性大于40%，但是不同基因群的基因组基本结构却十分保守。TTV的分类学地位目前尚不明确。
致病性 TTV除可以经血传播外，还可通过粪-口途径、唾液飞沫、精液和乳汁等多途径传播。一些动物中亦发现了TTV的存在，但其作为传染源的意义尚不清楚。
TTV感染呈全球性分布，人群中感染率极高。用UTR PCR检测，欧美等发达国家正常献血员的感染率约33%～76%，亚洲、非洲和南美洲等正常献血员的感染率为90%～100%。这些差异除与当地的卫生环境条件有关外，还与各自UTR PCR检测技术的灵敏度有一定的关系。TTV感染后病毒血症持续很长时间甚至终生，多为不同基因型及基因群的混合感染。TTV感染一般表现为无症状携带者，至今尚未发现TTV有引起肝炎或其他疾病的能力。
TTV在人体内的复制部位尚不确切。 TTV可以在黑猩猩体内传代，但未见引起明显的肝生化指标异常及肝组织细胞病变表现。
由于流行病学、临床资料及动物实验均不支持TTV的致病作用，因此有学者提出：TTV可能为人体的“正常病毒群”，在一定的条件下对人有益无害。
微生物学检查法 目前，TTV的实验室诊断仅为PCR技术。由于TTV基因组存在较大的异质性，因此PCR引物的位置对其灵敏度和检测结果影响极大。研究初期，用核酸序列高度变异的ORF1区衍生的N22 PCR法检测表明，各国的感染情况基本介于2%～30%之间，我国有高达50%的检出率报道。随着报道序列的增加，根据核苷酸序列高度保守的UTR设计引物建立了UTR PCR，可检测到目前已知的不同基因群及基因型的TTV变异株，人群检出率高达33%～100%。UTR PCR法的建立使人们对TTV流行病学特点及致病性有了更深入的了解和认识。
目前尚无成熟可行的免疫学检测技术供TTV实验诊断应用。
TTV在许多方面拥有与其他病毒不同特点，①人群中广泛分布持续感染，有极高的感染率，是否为人体“正常病毒群”及其存在的意义有待于深入研究。②作为DNA病毒，TTV具有很强的变异性，各基因群之间核酸序列差异（>40%）已超传统划分病毒“属”（genus）的范围，这在DNA病毒中实为罕见，同时也对传统的病毒分类学提出了挑战。③TTV在自然界各种动物中广泛存在，从低等的哺乳动物直到人类均已检测到其感染。虽然不同的变异株核酸序列高度变异，但其基因结构却十分保守。分析不同的动物和人的TTV，对揭示病毒的起源与进化、遗传与变异将有重要的意义。④基于TTV在人群中感染的特性，经过适当改造后的TTV可能成为一种基因载体，用于人类疾病的预防或治疗，以造福于人类。
